Il film segue la storia di due dalmata, Pongo e Perdita, che vivono a Londra con i loro padroni, Roger e Anita. Quando Anita annuncia che il suo dalmata, Perdita, è incinta, la perfida Cruella De Vil scopre la notizia e decide di rapire i cuccioli per farne dei cappotti di pelliccia.
Con l'aiuto di altri animali domestici e selvatici, Pongo e Perdita intraprendono un'avventura per salvare i loro cuccioli e gli altri 84 dalmata rapiti da Cruella e dai suoi scagnozzi. La carica dei 101 dalmata attraversa campi, boschi e città mentre cerca di evitare i pericoli e le trappole di Cruella.
Mentre l'avventura procede, Pongo e Perdita ricevono aiuto da altri animali, incluso un grosso San Bernardo di nome Ugo, e alla fine riescono a sconfiggere Cruella e a riportare a casa tutti i cuccioli sani e salvi.
La trama esplora temi di coraggio, amicizia, famiglia e il potere dell'unione. "La carica dei 101" è diventato un classico della Disney, amato per la sua storia avvincente, i suoi personaggi indimenticabili e il suo messaggio positivo.